摘要：[目的]本研究旨在通過克隆大螟的乙酰膽堿酯酶基因ace,進(jìn)行多態(tài)性分析,以便尋找抗藥性相關(guān)的突變位點(diǎn),為建立高通量藥劑篩選方法和適宜的抗藥性分子檢測方法提供新途徑。[方法]利用PCR和cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)技術(shù)克隆大螟的ace全長序列,通過分子特征和構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證。通過序列比對(duì),分析不同地理種群大螟ace基因的多態(tài)性,尋找經(jīng)典抗藥性突變位點(diǎn),同時(shí)測定相應(yīng)種群的三唑磷抗性,聯(lián)合分析相關(guān)的抗藥性突變位點(diǎn)。[結(jié)果]克隆獲得了大螟2個(gè)ace基因的全長cDNA,分別將其命名為Sinace1和Sinace2(GenBank登錄號(hào)分別為MK641586和MK641585)。它們均含有乙酰膽堿酯酶家族的保守結(jié)構(gòu)特征,系統(tǒng)發(fā)育樹分析表明它們和鱗翅目近緣種的ace基因親緣關(guān)系最近。關(guān)鍵靶標(biāo)基因Sinace1在4個(gè)地理種群的97條基因序列中共發(fā)現(xiàn)了比率不同的107種核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)和21種氨基酸突變類型,但未發(fā)現(xiàn)經(jīng)典抗藥性位點(diǎn)的突變。生物測定結(jié)果表明:不同地理種群的大螟對(duì)三唑磷的敏感性相差較小(1~5倍),對(duì)比分析也沒有發(fā)現(xiàn)種群之間突變比率與抗性水平一致的突變位點(diǎn)。[結(jié)論]大螟ace1基因尚未產(chǎn)生可測定的抗藥性突變,但本研究率先克隆報(bào)道了大螟的2個(gè)ace基因全長序列,并揭示了大螟不同地理種群ace1基因的主要多態(tài)性位點(diǎn)。