摘要：人轉(zhuǎn)運蛋白SR2(TRN-SR2)與HIV-1整合酶(IN)相互作用是抗HIV治療的有效靶點,尋找和設(shè)計該靶點的高效抑制劑具有重要的臨床意義和廣闊的應(yīng)用前景。因此為了開展以TRN-SR2與HIV-1IN相互作用為靶點的抑制劑篩選研究,以pGEX-2T為載體的重組質(zhì)粒pGST-TRN-SR2在大腸桿菌Rosetta(DE3)中進行原核表達,并利用親和層析純化得到濃度為0.80mg/mL的重組TRN-SR2蛋白;然后采用生物膜干涉技術(shù)(BLI)進行體外檢測重組TRN-SR2蛋白與HIV-1IN的相互作用和結(jié)合情況。結(jié)果表明,重組TRN-SR2蛋白與HIV-1IN相互結(jié)合信號明顯升高,且測得平衡解離常數(shù)KD值為45.2nmol/L。最后利用均相時間分辨熒光技術(shù)(HTRF)和交叉滴定實驗確定了TRN-SR2與HIV-1IN在該靶點抑制劑篩選實驗體系中的最適反應(yīng)濃度分別為20和40nmol/L。以上研究結(jié)果說明原核表達的重組TRN-SR2蛋白的活性較好且與HIV-1IN體外相互作用明顯,同時在篩選實驗體系中TRN-SR2與HIV-1IN最適濃度的確定也為后續(xù)抑制劑的篩選提供了相應(yīng)的研究基礎(chǔ)。