摘要：目的建立一種快速、簡便、敏感和特異的基于線粒體細(xì)胞色素C氧化酶I(cytochrome C oxidase subunit I,CoI)基因序列的細(xì)胞基質(zhì)檢測方法,用于細(xì)胞種屬鑒別和不同種屬間的細(xì)胞交叉污染分析。方法①提取非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero細(xì)胞)、狗腎細(xì)胞(MDCK細(xì)胞)和牛腎細(xì)胞(MDBK細(xì)胞)基因組DNA,以PCR擴增相應(yīng)細(xì)胞的線粒體CoI基因保守區(qū)的基因條碼序列,將擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測其基因片段的大小,并與文獻報道的來源于ATCC相應(yīng)細(xì)胞系線粒體CoI基因保守區(qū)的基因條碼序列片段大小進行對比,以確定細(xì)胞的種屬類別;②用Vero細(xì)胞、MDCK細(xì)胞和MDBK細(xì)胞的線粒體CoI基因保守區(qū)的基因的特異性引物分別與相應(yīng)細(xì)胞和其他不同種屬的細(xì)胞的基因組DNA進行PCR擴增,檢測方法的特異性;用不同濃度的細(xì)胞基因組DNA與相應(yīng)細(xì)胞的線粒體CoI基因保守區(qū)的基因的特異性引物進行PCR擴增,檢測方法的靈敏度;③以不同種屬細(xì)胞的線粒體CoI基因保守區(qū)的基因的特異性引物分別與多種細(xì)胞混合液提取的細(xì)胞基因組DNA進行PCR擴增,檢測細(xì)胞間的交叉污染。結(jié)果 Vero細(xì)胞、MDCK細(xì)胞及MDBK細(xì)胞線粒體CoI基因保守序列中的基因條碼序列片段大小,與來源于ATCC相應(yīng)細(xì)胞系線粒體CoI基因保守序列中的基因條碼序列片段大小相符。該方法具備較好的特異性,檢測靈敏度為1.0 ng/μL,不同種屬間細(xì)胞的交叉污染可被檢出。結(jié)論該方法可有效地判斷細(xì)胞的種屬來源,亦可用于不同種屬間細(xì)胞交叉污染的分析。