摘要：為建立檢測豬流行性腹瀉病毒(PEDV)血清特異性IgA抗體的間接ELISA方法,本研究利用融合PCR的方法,將PEDV G2型LNct2a株S蛋白的S1基因片段與人源IgG分子的Fc基因片段融合,克隆于真核表達(dá)質(zhì)粒pAAV-IRES-hr GFP中,構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pAAV-LNCT2-S1-Fc并轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,表達(dá)并純化了S1蛋白。以純化的S1蛋白作為包被抗原,以羊抗豬IgA-HRP為二抗,通過優(yōu)化反應(yīng)條件,建立了檢測PEDV G2型特異性IgA抗體的間接ELISA方法,并對該方法進(jìn)行了特異性、敏感性及重復(fù)性試驗(yàn)。特異性試驗(yàn)結(jié)果顯示該方法對豬傳染性胃腸炎病毒、輪狀病毒、豬德爾塔冠狀病毒和圓環(huán)病毒的陽性血清均無交叉反應(yīng);敏感性試驗(yàn)結(jié)果顯示該方法能夠檢測出400倍稀釋的陽性血清;批內(nèi)和批間重復(fù)性變異系數(shù)均小于10%。利用該間接ELISA方法和間接免疫熒光方法(IFA)同時對臨床樣品檢測,結(jié)果顯示二者總符合率為98.6%。本研究建立的ELISA方法特異性強(qiáng)、敏感性高、重復(fù)性好,能夠用于檢測及評價血清中PEDV特異性IgA抗體的水平,為PEDV流行情況及免疫效果評價提供了有效的手段。