摘要：為建立快速、準(zhǔn)確檢測(cè)鱖彈狀病毒(SCRV)的TaqMan熒光定量PCR方法,本實(shí)驗(yàn)根據(jù)彈狀病毒N基因中的保守序列,設(shè)計(jì)合成了一對(duì)特異性引物和TaqMan探針,以構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒為模板,經(jīng)條件優(yōu)化后建立了SCRV的TaqMan熒光定量PCR檢測(cè)方法,并對(duì)該方法的特異性、敏感性和重復(fù)性進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果顯示,建立的TaqMan熒光定量PCR檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)為0.999,質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品在1×10~8拷貝/μL~1×10~1拷貝/μL范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系;該方法可以特異性檢測(cè)SCRV,但對(duì)草魚(yú)出血病病毒(GCRV)、錦鯉皰疹病毒(KHV)、羅非魚(yú)湖病毒(TiLV)、石斑魚(yú)虹彩病毒(SGIV)、傳染性脾腎壞死病(ISKNV)、神經(jīng)壞死病毒(NNV)及鯉春病毒血癥病毒(SVCV)等7種常見(jiàn)魚(yú)類(lèi)病毒檢測(cè)結(jié)果均為陰性;最低可檢測(cè)到的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品濃度為102拷貝/μL,比常規(guī)PCR方法靈敏100倍;該方法組內(nèi)與組間變異系數(shù)均小于2%。采用該方法對(duì)35份臨床樣品進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示陽(yáng)性檢出率為31%,而普通PCR陽(yáng)性檢出率為14%,該方法檢出率比常規(guī)PCR高。本研究建立的SCRV的TaqMan熒光定量PCR檢測(cè)方法為SCRV的快速檢測(cè)提供了可行的技術(shù)手段。